Качественная характеристика клеток крови

Большое диагностическое значение имеет изучение морфологии форменных элементов в окрашенных мазках крови. Эти исследования позволяют определить соотношение многочисленных клеточных элементов, оценить степень их морфологической зрелости, определить патологию. Качественный анализ необходим в первую очередь в тех случаях, когда имеют место изменения числа эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов крови. Определенную диагностическую значимость этиисследования приобретают и при нормальных количественных показателях крови.

      Эритроциты. При изучении морфологии эритроцитов мазки должны быть достаточно тонкими, хорошо фиксированными и окрашенными. При этом клетки расположены изолированно, окрашены в розоватый цвет. Анализируют интенсивность окраски эритроцитов, их величину, форму, наличие ядер, ядерных остатков, зернистости. В мазке нормальной крови эритроциты имеют сходную форму. У млекопитающих они имеют вид круглых безъядерных дисков с вдавлением в центре. Эритроциты верблюдов и лам – овальной формы. У рыб, амфибий, рептилий и птиц эритроциты содержат ядро, гораздо крупнее и овальной формы.

     В некоторых случаях у животных можно обнаружить эритроциты других форм: в виде групп, овала, полумесяца, звезды и т.д. Это иногда отмечается и у здоровых животных, главным образом у молод­няка, коз и морских свинок. Такие эритроциты называются пойкилоцитами, а состояние крови – пойкилоцитозом. Пойкилоцитоз – показа­тель дегенерации крови, чаще он наблюдается при анемиях и тяжелых септических заболеваниях.

    Необходимо помнить, что форма эритроцитов может быть изменена при неправильном приготовлении препарата. Размеры эритроцитов в мазках из периферической крови соответствуют средним значениям для животных данного вида. Но наряду с эритроцитами нормальных размеров (нормоцитами) встречаются клетки очень больших (макроциты) или очень малых размеров (микроциты). Такое состояние называют анизоцитозом. Резко выраженный анизоцитоз обнаруживают при анемиях и истощении костного мозга. Выявление изменения диаметра эритроцитов приобретает большое значение для дифференциальной диагностики анемий.

     Более точное представление о характере анизоцитоза дает эритроцитометрия, которая может быть проведена либо в мазке крови с помощью специального окулярмикрометра, либо в разведенной крови в счетном аппарате. В первом случае измеряют не менее 100 эритроцитов и получают представление о распределении их размеров в процентах, а во втором случае – распределении эритроцитов определенного размера в 1 мкл крови. Полученные результаты для наглядности можно представить в виде эритроцитометрической кривой (кривая Прайс-Джонса). В крови здоровых животных на долю нормоцитов приходится 70-75% от общего числа эритроцитов, количество микро- и макроцитоз примерно одинаково (12-15%).

     Увеличение числа микроцитов (до 40-50%) наблюдается при различных формах железодефицитных анемий, соответственно уменьшается процент нормоцитов. Возрастание содержания макроцитов сопутствует В₁₂– и фолиево-дефицитным, апластическим и гемолитическим анемиям. Количество макроцитов при этих формах анемий часто достигает 50%, встречаются и гигантские эритроциты – мегалоциты, вдвое превосходящие размеры нормоцитов. Макроцитоз является достаточно постоянным симптомом диффузного поражения печени: при циррозе печени число макроцитов достигает 30-45%. 

    Непосредственно с размером эритроцитов связано понятие о его объеме. Средний объем эритроцитов вычисляют путем деления гематокритной величины на общее число эритроцитов в 1 мкл крови. Современные гематологические автоматы используют наряду с указан­ным принципом ещё и кондуктометрический метод. Увеличение среднего объема эритроцитов наблюдается при макроцитарных анемиях, микросфероцитозе, при В₁₂-дефицитных анемиях. Уменьшение показателя характерно для микроцитарных анемий и талассемий, т.е. анемий, связанных с нарушением синтеза глобина.

     Нормальные эритроциты окрашиваются только кислыми красками (ацидофильны). В связи с тем, что в центре эритроцита гемоглобина меньше (вогнутость), нормальные эритроциты интенсивно окрашивается по периферии и более бледно в центре – ортохромазия. Тон мазка розовый или желто-розовый. Эритроциты с пониженным содержанием гемоглобина окрашиваются более бледно, а в центре иногда совсем не окрашиваются – олигохромазия или гипохромия. Часто гипохромия сочетается с микроцитозом, что характерно для железодефицитных состояний.

    При анемиях встречается и противоположное явление – гиперхромия, когда окраска эритроцитов более интенсивна, чем в норме, без просветления в центре. Гиперхромные, макроцитарные и даже мегалоцитарные (гигантские) эритроциты характерны для анемий, обусловленных дефицитом витамина В₁₂, фолиевой кислотой. Гиперхромия может сочетаться и с микроцитозом за счет увеличения объема клеток при изменении или формы: эритроциты приобретают сферическую, шаровидную форму. Гиперхромазия наблюдается и при гемолитической анемии, когда гемоглобин распавшихся эритроцитов адсорбируется и накапливается в оставшихся, вследствие чего они окрашиваются сильнее. Явление полихромазии (или полихроматофилии) связано со способностью эритроцитов одновременно окрашиваться кислыми и основными красками. Эритроциты при этом окрашиваются всероватый, синевато-розовый или бледно-фиолетовый цвет. Полихроматофилия свойственна молодым эритроцитам – ретикулоцитам и проявляется при интенсивном поступлении в кровяное русло незрелых форм. Это наблюдается после кровопотери, при гемолитической анемии и других формах регенераторных анемий.

    Кроме отмеченных изменений окраски эритроцитов, в мазках крови встречаются клетки с окрашенной периферией и темного центра на фоне бледного центрального участка – мишеневидные эритроциты. Эти формы характерны для талассемий, длительных механических желтух, свинцовых интоксикаций и пр. При указанных состояниях иногда выяв­ляются и эритроциты с базофильной зернистостью – явление, когда в протоплазме эритроцитов видны различной формы и ве­личины гранулы темно-синего цвета. Природа этих гранул выяснена недостаточно. Базофильная зернистость наблюдается одновременно с другими патологическими изменениями при вторичных анемиях и септических заболеваниях.

    На усиленную работу костного мозга указывает появление в крови эритроцитов с зернисто-нитчатой субстанцией ретикулоцитов. В норме ретикулоцитов в крови у молодняка, особенно у новорожденных, значительно больше, чем у взрослых животных. Общее количество ретикулоцитов в крови здоровых животных ко­леблется (в процентах к числу нормальных эритроцитов) в следующих пределах: у лошадей 0,01-0,32; у овец 0,02-0,18; у свиней 2,7-14,0; у собак 0,1-0,3; у кроликов 0,8-1,6; у морских свинок 0,8; у крыс 0,5; у белых мышей 1,2; у гусей 18,4-21,6; у уток 13,0-35,0.

    Изучение форм сетчатости имеет большое диагностическое значение, так как характер сеточки соответствует возрасту эритроцитов. Наиболее распространенным и чувствительным красителем для ретикулоцитов является бриллиантовый крезоловый синий; можно ис­пользовать азур ІІ, азур I, метиленовый синий и др.

    К наиболее молодым клеткам относятся ретикулоциты с густым комкообразным скоплением нитчато-сетчатой субстанции в центре, сама клетка увеличена, протоплазма бледна. Этот вид ретикулоцитоз встречается при тяжелом малокровии (при лейкемии, инфекционной анемии). В крови здоровых животных таких клеток нет. Ретикулоциты со сплетением нитей, идущих во всех направлениях, иногда в виде нескольких отдельных частей, появляются при вторичных анемиях (кровопаразитарные заболевания и др.). Появление в крови эритроцитов, содержащих только отдельные зернышки или ниточки, свидетельствует о небольшом раздражении костного мозга (кровопотери, действие лекарств).

     Патологическим признаком является обнаружение в мазках периферической крови эритроцитов с сохраненным ядром – нормобластов. Ядро нормобластов расположено в центре, окрашено в темно-фиолетовый цвет с типичной "колемовидной" структурой хроматина; в более зрелых фомах ядро пикнотичное и бесструктурное. Нормобласты (или эритробласты) – молодые клетки обычного кроветворения и находятся в костном мозге. Иногда встречаются макробласты и микробласты, величина которых больше или меньше нормобластов.

     При злокачественном малокровии появляются огромные клетки – мегалобласты. Появление этих ядерных клеток в перифери­ческой крови служит признаком патологической регенерации крови. Остатки ядра имеют форму кольца, петли, восьмерки и т.п. (тельца Кабота) или 1-2 мелкие гранул (тельца Жолли).

    Тромбоциты. В клинической практике редко прибегают к качественному исследованию этих клеток, которые дифференцируют по морфологическим признакам (по Кенигсон Т.В., 1948; Германов В.А., Тиксанов О.Н., 1965 и др.) или путем тромбоцитометрии (Тоцкая А.А, 1967).

    Увеличение содержания юных форм тромбоцитов наблюдается при кровопотере, свидетельствует об усиленной регенерации. Увеличение содержания старых форм, вакуолизированных, форм раздражения и уменьшения содержания зрелых тромбоцитов характерны для различных воспалительных процессов, интоксикаций, злокачественных новообразований.

    Лейкоциты. Наиболее важным дифференциальным исследованием лейкоцитов является подсчет лейкоцитарной фор­мулы или лейкограммы. В зависимости от вида, возраста, пола, конституции и породы животного, а также от времени дня и характера кормления даже у здоровых животных в показаниях лейкоцитарной формулы крови наблю­дается значительные колебания. Поэтому при оценке лейкоцитарной формулы пользуются средними цифрами, учитывая предельные колеба­ния содержания в крови клеток разных форм.

     Лейкоцитарную формулу подсчитывают при микроскопии окрашен­ных мазков крови с обязательным использованием иммерсионного объ­ектива. Применение сухих объективов микроскопа недопустимо, так как при этом не удается детально исследовать морфологию клеток. Лучше лейкограмму определить при искусственном освещении с голу­бым светофильтром. Микроскоп должен иметь крестоподвижный столик.

     Лейкоциты различают в зависимости от формы, величины, окраски ядра и цитоплазмы, наличия в ней зернистости. Выявление этих свойств клеток, а соответственно и правильный подсчет лейкоцитарной формулы в большой степени зависят от качества мазков крови, их правильной фиксации и хорошей окраски. Подробно с техникой приго­товления мазка, его фиксацией и окраской можно познакомиться в справочном издании. (Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики)

     Принцип подсчета лейкоцитарной формулы сводится к дифференцированию в мазках крови не менее 100 лейкоцитов, а при обнаружении отклонения от нормы – не менее 200 лейкоцитов с выведением про­цента каждого вида лейкоцитов. Значительно облегчают дифференци­рование лейкоцитов и выведение формулы широко используемые в ла­бораториях клавишные счетчики, в которых на шкале нанесены ос­новные формулы лейкоцитов с соответствующим для каждой формы кла­вишей и одновременным подсчетом общей суммы клеток.

    В настоящее время создан ряд гематологических автоматов, поз­воляющих автоматизировать подсчет лейкоцитарной формулы. Эта ра­бота проводится с использованием двух принципов:

1. Дифференцировка лейкоцитов в окрашенных мазках с помощью микроскопа путем сравнении различных свойств клетки со стандарт­ными, хранящимися в памяти компьютера. Аппараты различают шесть нормальных видов лейкоцитов (нейтрофилы палочкоядерные и сегментоядерные, эозинофилы, базофилы, лимфоциты, моноциты), а также атипичные лимфоциты, незрелые гранулоциты и др. Кроме того, оце­нивается морфология эритроцитов и тромбоцитов.

2. Дифференцировка лейкоцитов в цельной крови в зависимости от цитохимических свойств клеток путем использования селективной окраски. При окраске на пероксидазу выявляют нейтрофилы, эозино­филы и лимфоциты; с помощью окраски на эстеразу обнаруживают моно­циты, а окраской альцианом синим выявляют базофильные лейкоциты. Автомат работает по проточному принципу.

     Производительность автоматов – около 60 исследований в час. Многие из них снабжены устройством для автоматического изготовле­ния мазков.

      Поскольку лейкоцитарная формулу подсчитывают на 100 или 200 клеток, понятно, что она дает лишь относительное представление о распределении в крови различных видов лейкоцитов. Более точное представление можно получить, если пересчитать лейкоцитарную фор­мулу на 1 мкл крови с учетом общего числа лейкоцитов в 1 мкл кро­ви. Особенно важно оценивать абсолютные значения отдельных лейко­цитов в тех случаях, когда в крови имеется изменение числа лейко­цитов в виде лейкопении или лейкоцитоза.

    Увеличение количества нейтрофилов в крови (нейтрофилия, нейтрофилез) встречается чаще других лейкоци­тозов и наблюдается при большинстве острых бактериальных инфекци­ях, особенно в первые дни болезни, при гнойных процессах, различ­ных интоксикациях, злокачественных новообразованиях, после оперативных вмешательств. В этих случаях увеличение процентного содер­жания нейтрофилов часто сочетается с лейкоцитозом, поэтому имеет место не только относительный, но и абсолютный нейтрофилез.

    Нередко при тяжелых инфекциях, интоксикациях, гематосаркомах отмечает нейтрофильный сдвиг формулы влево, т.е. увеличение в крови количества молодых форм нейтрофилов (миелоцитов, юных, палочкоядерных). Ядерный сдвиг влево, называемый иначе регенеративный сдвиг, свидетельствует об усилении регенерации крови. В большинстве случаев при нейтрофильном лейкоцитозе происхо­дит увеличение количества палочкоядерных форм – простой регенеративной сдвиг влево. Он возникает при скрыто протекающих хронических инфекциях, при слабом воздействии токсина, при воспа­лительных и гнойно-септических процессах. При острых инфекционных болезнях иряде других заболеваний наблюдается появление в крови более незрелых форм (миелоциты, промиелоциты, миелобласты) нейтро­филов – так называемый лейкемический сдвиг.

     Сдвиг ядра влево с умеренным лейкоцитозом говорит о благопри­ятном течении болезни. Значительное нарастание лейкоцитоза и сдвиг ядра влево долж­но истолковываться осторожно, а нарастание сдвига ядра влево без увеличения общего количества лейкоцитов является неблагоприятным признаком, указывающим на ослабление гемопоэза у животных.

     Сдвиг ядра вправо (дегенеративный сдвиг) характеризуется появлением в периферической крови нейтрофилов с дегенеративно измененным ядром или протоплазмой, увеличением про­цента сегментоядерных нейтрофилов и нейтрофилов с большим коли­чеством сегментов. Дегенеративный сдвиг является показателем функ­ционального угнетения костного мозга и встречается при сильных и длительных интоксикациях, при злокачественном малокровии.

    Детальные исследования морфологии нейтрофилов включают изуче­ние их цитоплазмы и ядра. Появление более крупной, чем в норме, зернистости светло-фиолетового цвета, неравномерной, обозначаемой как токсигенная зернистость, характерно для тяжелых инфекций, интоксикаций, гнойных поражений. При воспа­лительных и инфекционных заболеваниях в нейтрофилах могут появ­ляться тельца Деле – крупные бледно-голубые комочки в цитоплазме. Эти образования обнаруживают в клетках, в которых от­сутствует или слегка выражена токсичная зернистость, они сопутст­вуют более легкому течению процесса. Эти же состояния могут вызывать такие явления, как пикноз ядра, кариолиз, кариорексис, ци­толиз, вакуолизация ядра и цитоплазмы.

    Увеличение числа сегментов в ядре (гиперсегментация) является симптомом В₁₂-дефицитного состояния и сопровожда­ется появлением 5-7 сегментов в ядрах нейтрофилов. Гиперсегментация, т.е. появление более 4 сегментов в ядре, характерна и для наследственных аномалий, касающихся изменения сегментации ядер нейтрофилов.При некоторых заболеваниях (инфекции, лейкозы) структура ядер нейтрофилов грубая, пикнотичная или с темными участками базихроматина.

    Уменьшение числа нейтрофилов (нейтропения) сопутствует вирусным заболеваниям, хроническим инфекциям, некото­рым гемобластозам, спленопатиям, встречается при контакте с миелодепрессивными веществами и пр. Выраженная нейтропения наблюдает­ся при агранулоцитозе, апластической анемии. Относительная нейт­ропения характерна для хронического лимфолейкоза.

    Эозинофильный лейкоцитоз (эозинофилия) – частый симптом при различных аллергических заболеваниях. Уме­ренная эозинофилия может быть при ожогах, обморожениях, экземе, крапивнице. Эозинофилию самой различной степени наблюдают при разнообразных: паразитарных болезнях (трихинеллез, описторхоз, ас­каридоз, эхинококкоз и др.), ревматизме, при длительном применении антибиотиков, сульфаниламидов и других лекарственных препаратов. Небольшая эозинофилия может быть при хроническом миелолейкозе, лимфогранулематозе, злокачественных новообразованиях, туберкулезе, эмфиземе легких. Эозинофилия при воспалительных и гнойно-септических процессах на фоне лимфоцитоза и незначительного ядерного сдви­га нейтрофилов является предвестником благоприятного исхода забо­левания. Увеличение числа эозинофилов отмечают при начальной ста­дии.

    Уменьшение числа эозинофилов и исчезновении их из крови (эозинопения и анэозинофилия) наблюдается на высоте некото­рых острых инфекционных и вирусных заболеваний, интоксикаций, в агональном состоянии, на стадии истощения стрессовой реакции. Анэозинофилия при пироплазмозе лошадей служит основанием для плохого прогноза. Появление в крови эозинофилов в этих случаях хороший прогностический признак.

    При дегенеративных и наследственных изменениях морфологии эозинофилов могут появляться формы с гиперсегментацией ядер (3 и более сегментов); наблюдается изменение цвета зернистости до темно-фиолетовой, увеличенного размера, или зернистости розово­го цвета, но крупной и менее обильной, чем в нормальных эозинофилах; отмечают вакуолизацию цитоплазмы.

    Базофильный лейкоцитоз (базофилия) как самостоя­тельней вид лейкоцитоза наблюдается сравнительно редко. Умеренная базофилия (2-5%) может сопутствовать хроническому миелолейкозу, полицитемии. При хроническом миелолейкозе базофилия часто соче­тается с эозинофилией (эозинофильно-базофильный синдром). При этом высокая базофилия является прогностически неблагоприятным признаком.

    Базофилия встречается при нервно-мышечном утомлении и голо­дании животных, при гемофилии, инъекции под кожу различных сыво­роток, при гельминтозах. Базофильной лейкоцитоз иногда наблюдает­ся при чуме свиней и паралитической миогемоглобинемии лошадей.

    Лимфоцитоз – увеличение в крови количества лимфоцитов. Лимфоци­тоз может быть относительный, когда количество лимфоцитов в крови увеличива­ется за счет уменьшения других видов клеток, и абсолютный, когда увеличивается их количество в 1 мкл крови. У здоровых животных лимфоцитоз может регистрироваться после поедания корма с большим содержанием жиров.

    Относительный лимфоцитоз с лейкопенией характерен для вирус­ной инфекции, в том числе  для острого вирусного гепатита, a также для бруцеллеза, малярии, лейшманиоза, туляремии, апластической анемии. Незначительный лимфоцитоз бывает при заболеваниях нейтрофильно-эозинопенической группы (пневмония, остеомиелит, сепсис и др.) и указывает на фазу выздоровления. Увеличение количества лимфоцитов сопутствует туберкулезу, чуме свиней, инфекционной ане­мии, инфлюэнце, пироплазмозу, иногда паратифу.

     Лимфоцитоз на фоне агранулоцитоза или лимфатической лейкемоидной реакции – неблагоприятный прогностический признак, сви­детельствующий о снижении микрофагоцитарной функции организма вследствие истощения гранулопоэза. Лимфоцитоз встречается при тиреотоксикозе, гипофункции яични­ков и бронхиальной астме. Особенно выраженный лимфоцитоз – относи­тельный и абсолютный (до 90 % и более) отмечается при хроническом лимфолейкозе.

     Уменьшение количества лимфоцитов в крови (лимфопения) также может быть относительной и абсолютной. Наиболее час­то лимфоцитопения наблюдается при гнойно-септических и острых воспалительных процессах, инфекционных болезнях, интоксикациях, то есть при всех тех состояниях, когда в лейкоцитарной формуле увеличено число нейтрофилов. Кроме того, абсолютная лимфоцитопения нередко сопутствует хроническим заболеваниям печени, особен­но циррозу печени с лейкопенией.

     Следует отметить, что при некоторых тяжелых инфекциях, вос­палительных и гнойно-септических заболеваниях лимфоцитопения, особенно при выраженной нейтрофилии, указывает на развитие ослож­нений и является неблагоприятным прогностическим симптомом.

    Морфологические изменения ядра и цитоплазмы лимфоцитов проявляются пикнозом ядра, нарушением его структуры (кариолиз), исчезновением цитоплазмы в препаратах (голоядерные формы).  Особенно выражены морфологические изменения лимфоцитов при опухолевых заболеваниях лимфоидной ткани: при хроническом лимфолейкозе появляются в большом количестве клетки в состоянии цито­лиза. Могут наблюдаться и другие изменения морфологии лимфоцитов. Так, при одном из вариантов хронического лимфолейкоза ("волосатоклеточном" лейкозе) лимфоциты в мазках крови имеют неровные контуры, с мелкими отростками ("волосатые"), структура цитоплазмы не­равномерная, базофильной окраски.

    Моноцитоз (увеличение числа моноцитов в крови) в ветеринарии изучен недостаточно. Значительный относительный и абсолютный моноцитоз характерен для хронического моноцитарного лей­коза; наблюдается как при лейкоцитозах, так и при лейкопениях. Моноцитоз отмечают при инфекционной анемии лошадей, туберкулезе, бруцеллезе, трипаносомозе, пироплазмозе, листериозе, мыте, ост­ром эндокардите и других септических заболеваниях, при злокачест­венных опухолях и лимфогранулематозе.

     Моноцитопения – (уменьшение количества моноцитов в крови) обнаруживается при тяжелых септических состояниях, при ряде острых инфекций, обычно с одновременным уменьшением лимфо­цитов и эозинофилов. При резко выраженной нейтрофилии иногда мо­ноциты в крови исчезают, что служит неблагоприятным признаком. Появление моноцитов в крови после их исчезновения или даже их уве­личение при септических заболеваниях является благоприятным симп­томом.

    При интоксикации и септическом состоянии отмечены структуры моноцитов, проявляющиеся в вакуолизации и базофилии их цитоплазмы.